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爱博体育竞猜:攻略 高效液相色谱仪常见毛病及管理门径

来源:爱博体育可以买球 发布时间: 2022-01-12 18:48:34
  高效液相色谱(HPLC)਷

产品概述

  高效液相色谱(HPLC)是近30年进展起来的一种拥有高灵活度、高采选性的高效神速分手明白技艺。它既能用于微量组分的明白测定,又能用于巨额的造备分手,精巧多样,其操纵局限已领先其他各式分手伎俩,加倍正在中药样品的明白分手方面更充溢表现它的善于,为胀励该界限的提高和进展作出了宏壮功绩。

  高效液相色谱正在操纵进程中常会显现少少影响明白结果的题目,倘使操纵职员认识常见题目及其成因和合连处理伎俩,就能做到早防患勤维持,使明白结果坚持较好的宁静性与较高的无误性。

  高效液相色谱仪体系构成:液相色谱仪重要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据解决体系构成。对付全部体系而言,柱子、泵和检测器是中心部件同时也是易出题宗旨重要部位。

  高效液相举动一种高紧密仪器,倘使正在操纵进程中不遵守确切操作的话,就容易导致少少题目。个中最常见的即是柱压题目、漂移题目、峰型很是题目。

  柱压题目是操纵高效液相色谱仪进程中需求亲昵幼心的地方,柱压的宁静与色谱图峰形的诟谇、柱效、分手效率及保存工夫等亲昵合连。所谓柱压宁静并不是指压力值宁静于一个恒定值而是指压力震动局限正在50 PSI(3.3 Bar)之间(正在操纵梯度洗脱时,柱压稳定徐徐的蜕化是允诺的)。压力过高、过低都属于柱压题目。

  这是高效液相色谱仪正在操纵中最常见的题目,指的是压力忽然升高,通常都是因为流途中有停顿的源由。此时,咱们该当分段实行反省。

  1)最先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自正在淌下,倘使液体不滴或徐徐淌下,则是溶剂过滤头停顿。

  解决伎俩:用30%的硝酸浸泡半个幼时,正在用超纯水冲刷清洁。倘使液体自正在淌下,溶剂过滤头寻常,再反省;

  2)掀开Purge阀,使活动相只是程柱子,倘使压力没有光鲜降低,则是过滤白头停顿。

  解决伎俩:将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个幼时。倘使压力降至100 PSI(6.7 Bar)以下,过滤白头寻常,再反省;

  解决伎俩:倘使是缓冲盐停顿,则用95%的水冲至压力寻常。倘使是少少强保存的物质导致停顿,则要用比现正在活动相更强的活动相冲至压力寻常。假设按上面的伎俩长工夫冲刷压力都不降低,则可探究将柱子的进出口反过来接正在仪器上,用活动相冲刷柱子。这时,倘使柱压仍不降低,只要换柱子入口筛板,但一朝操作不甚,很容易变成柱效降低,是以尽量罕用。

  1)压力过低的表象通常是因为体系吐露,解决伎俩:寻找各个接口处,分表是色谱柱两头的接口,把吐露的地方旋紧即可;

  2)当然另有一个源由即是泵里进了氛围,但此时呈现的往往是压力不稳,忽高忽低,更急急一点会导致泵无法吸上液体。解决伎俩:掀开Purge阀,用3~5 ml/min的流速冲刷,倘使不可,则要用专用针筒正在排空阀处借住表力将气泡吸出。

  通常说来,呆板刚起动时,基线容易漂移,也许要半个幼时的平均工夫,倘使你用了缓冲溶液或缓冲盐,另有即是正在低波长下(220 nm)平均工夫相对会较量长,但倘使你正在实践进程中发明基线漂移,则你要探究下面的源由:

  1)柱温震动。处理伎俩:负责好柱子和活动相的温度,反省是否有掀开的窗户或空调对着柱温箱;

  2)贯通池被污染或有气体。 处理伎俩:用甲醇或其他强极性溶剂冲刷贯通池(最好断开柱子)。如有需求,能够用1N的硝酸(不要用盐酸);

  5)样品中有强保存的物质(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,从而呈现出一个逐渐升高的基线。

  处理伎俩:操纵维护柱,如有须要,正在进样之间。正在明白进程中,按期用强溶剂冲刷柱子;

  6)检测器没有设定正在最大罗致波所长。处理伎俩:将波长调解至最大罗致波所长;

  保存工夫重现是液相机能诟谇的一个主要标记,统一种东西,两次的保存工夫相差不要领先15 s,领先了半分钟可看做保存工夫漂移,就无法实行定性,你要探究以下源由:

  1)温控欠妥。处理伎俩:调好柱。

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